细胞生物学实验-动物实验外包服务公司

应用简介细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞。检测方法 MTT，CCK-8，BrdU，EdU等方法是常见的细胞增殖检测技术，分别从代谢活性和DNA合成的角度来反应细胞的增殖情况。MTT和CCK-8检测原理为活细胞线粒体中的一些脱氢酶能使检测试剂还原为甲瓒，而死细胞无此功能。BrdU和EdU则能都在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的DNA分子，通过基于与荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性。MTT技术原理活细...

细胞增殖
应用简介自噬与多种生理反应相关，比如肿瘤，炎症，免疫应答，氧化应激等。通常情况下，对于自噬的研究，除了发生的机制本身外，更多的是将自噬与各种生命活动或者疾病结合起来。比如研究自噬在肿瘤的发生发展，炎症反应，氧化应激等不同生物学功能的作用。技术原理自噬是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程。自噬体（自噬体）为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质，长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体，粗面内质网和微体，病毒和细菌等。自噬过程： 1、细胞接受自噬诱导信号后，在胞浆的某处形成一个小的类似"脂质...

细胞自噬
应用简介凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。通过原代分离获得的细胞具有与体内细胞相似的生物学特征，是研究生物体相关生命活动的理想材料。原理介绍原代细胞的分离是将人/小鼠等特异模式动物的细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖的过程。原代培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把第一代至第十...

原代细胞分离与培养
技术原理慢病毒包装：使用3质粒慢病毒包装系统，慢病毒系统使用pLKO.1-EGFP、psPAX2、pMD2.G，过表达慢病毒系统使用pLVX-AcGFP、psPAX2、pMD2.G三质粒系统，将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至HEK293T细胞中，培养48h后，收集上清。纯化后留取部分检测病毒滴度，其余病毒冻存于-80℃冰箱中。滴度检测：将病毒颗粒使用梯度稀释，分别感染293T细胞，感染72h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算病毒滴度。细胞感染：在病毒感染前一天对细胞进行计数，接种约10000个细胞于12孔板中，培养过夜后...

慢腺病毒细胞株构建
应用简介肿瘤细胞/癌细胞的耐药性是肿瘤/癌症难以根治的重要原因。体外构建的耐药细胞株，能模拟肿瘤细胞/癌细胞对特异药物耐药性的形成过程，有助于人们理解肿瘤细胞/癌细胞获得耐药性的机制，筛选获得抗耐药性的特异药物，并对相关疾病进行有针对性地临床治疗。原理介绍一种药物作用于某类细胞后，会杀死其中没有抗性的细胞，而这类细胞中具有抗性的细胞不会被杀死，即进行了选择。具有抗性的细胞大量繁殖产生很多抗性后代，再用这种药物时表现出的药效大大下降的现象就是细胞的耐药性。采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导肿瘤细胞对特定药物产生耐药性，从而构建出对特定药物...

耐药细胞株构建
应用简介肿瘤细胞通过膜表面特定受体与基质或基底膜的层粘连蛋白、纤维连接蛋白和IV型胶原等相粘连，然后肿瘤细胞可释放蛋白水解酶或激活基质中已存在的酶原，使基质成分降解，最后肿瘤细胞运动而充填到被水解了的基质的空隙处，如此三个过程不断重复肿瘤细胞不断向深层侵袭。技术原理本实验采用的Matrigel是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原等。将Matrigel铺在Transwell侵袭小室的多孔滤膜上，能形成与天然基底膜极为相似的基底膜结构。具有侵袭能力的细胞在趋化剂诱导下可穿过多孔滤膜，侵袭细胞经染色后，在显微镜下观察和计数。实验方法注意...

细胞侵袭
应用简介迁移是肿瘤细胞转移过程中必不可少的环节之一。肿瘤细胞与母体瘤分离，穿越血管壁，侵袭周边正常组织时，需要一定的运动能力。高转移的肿瘤细胞通常具奋较强的运动性。多种物质可剌激肿瘤细胞的迁移，如肿瘤细胞分泌因子、生长因子、细胞外基质成分(FN、LN)以及一些癌转移靶器官的代谢产物或分泌产物等生长因子对肿瘤细胞有趋化作用，可使其发生定向运动。测定方法以细胞划痕法和Transwell小室法。技术原理细胞划痕法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线...

细胞迁移
应用简介细胞凋亡是细胞主动实施的一种程序性死亡，是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。技术原理 AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。因此AnnexinV作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将AnnexinⅤ进行荧光素FITC标记，以标记了的AnnexinV作为荧光探针，利用流式细胞...

细胞凋亡检测
应用简介细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能（G0期）。由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量（2N），而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量（4N）,而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。技术原理 PI可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此，通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相...

细胞周期检测
应用简介用免疫磁珠做细胞分选(MACS)是高效简捷的免疫细胞及其它细胞的分离纯化方法。已包被一抗的磁珠与细胞表面相应分子特异性结合，或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠与预先已与细胞表面分子特异结合的一抗结合。磁珠携带与之结合的细胞吸附于分离柱/试管上，实现阳性细胞分离或阴性细胞的分离。技术原理流式分选：当经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分...

流式细胞分选
应用简介细胞划痕是一种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。技术原理创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法，也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”，在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口，以及比较图像以确定细胞迁移速率。实验方法注意事项 1、一般做划痕实验，都是在无血清或者底血清状态下培养的，否则细胞增殖就不能忽略。 2、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，这就解决了...

细胞划痕实验
应用简介克隆形成及细胞克隆接种存活率，通过观察单细胞集落形成情况，来计算克隆形成率，了解其增殖能力。技术原理单个细胞在体外持续增殖6代以上时细胞数量已达60个左右，此细胞群体成为克隆或集落，大小在1.0-2.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力，各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变，通过计数克隆形成率，可对单个细胞的增殖潜力做定量分析，了解细胞的增殖率和对生存环境的适应性。软琼脂培养或平板克隆是最常用的方法。实验方法技术总结 1、试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。 2、细胞...

细胞克隆实验